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分子生物学实验  061M5038H

学期:2016-2017学年秋 | 课程属性:实验课 | 任课教师:杨铁
课程编号: 061M5038H 课时: 60 学分: 1.5
课程属性: 实验课 主讲教师:杨铁
英文名称: Experiment of Molecular Biology

教学目的、要求

本课程为分子生物学专业研究生专业课,也可作为相关专业研究生的选修课。
通过本课程的学习,使研究生掌握现代分子生物学研究技术方法,并为相关学科从分子水平上阐明问题奠定实验技术基础。

预修课程

细胞生物学、生物化学、普通生物学、遗传学、分子生物学

教 材

主要内容

实验一 实验准备(4h)
1. 实验室规章制度
2. 分子生物学实验室安全讲解
实验二 从CDNA文库中靶片断扩增(4h)
1. 引物设计
2. PCR
3. 琼脂糖凝胶电泳PCR片断的验证
实验三 靶片断T载体的构建(4h)
1. PCR片断回收
2. T载体连接
实验四 原核感受态细胞的制备与转化(8h)
1. 单菌落的培养
2. 缓冲液制备
3. 利用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌
4. 筛选平板制备
5. T载体转化大肠杆菌感受态细胞
实验五 碱裂解法少量提取质粒DNA(12h)
1. 蓝白斑筛选
2. 接种
3.质粒提取
4.电泳验证
实验六T载体克隆的验证(6h )
1. 快速PCR验证法
2. 酶切验证法
3. 电泳验证
实验七 外源基因在原核中的表达(10h)
1. 含外源基因原核表达系统质粒的转化
2. 原核细胞的生长密度监测
3. 诱导表达
实验八 SDS-PAGE的检测(12h)
1. 样品的制备
2. 缓冲液的制备
3. SDS-PAGE的制备及检测
4.实验结果分析与总结

参考文献

(1)卢圣栋,现代分子生物学实验技术,高等教育出版社,北京,1993 
(2)魏群,分子生物学实验引导,高等教育出版社,1999年12月第一版。
(3)杨安钢等,生物化学与分子生物学实验技术,高等教育出版社,2001年2月第一版
(4)郝福英,朱玉贤等,分子生物学式样技术,高等教育出版社,北京,2002
(5)分子克隆实验指南(第三版),萨姆布鲁克,科技出版社,北京,2002

授课时间: 星期五, 第1、2、3、4、5、6、7、8节
授课地点: 学3-529(生命学院教学实验室)
授课周次: 3、4、5、6、7、8、9、10

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